Бактерии Helicobacter pylori повреждают поверхностный эпителий желудка и вызывают воспаление. Чаще всего обнаруживаются у пациентов с язвенной болезнью желудка (в 60-80 % случаев) и двенадцатиперстной кишки (90-100 % случаев).В настоящее время диагностика хеликобактериоза не представляет трудностей.
Чтобы выявить инфицирование бактериями, нужно сдать анализ крови из вены или пробы выдыхаемого воздуха (аэротест). В период обострения заболеваний желудка и двенадцатиперстной кишки назначается гастроскопия (ФГДС), при проведении которой врач-эндоскопист может взять участок слизистой (биоптат) для экспресс-теста или морфологического исследования на наличие Helicobacter pylori.
Методы диагностики
- доступен всем пациентам;
- не сопровождается выраженным дискомфортом и стрессом при проведении процедуры (инъекционный метод забора крови);
- прием лекарственных препаратов, применяемых для лечения заболеваний желудка и двенадцатиперстной кишки, не оказывает влияние на результат исследования.
Процедура забора крови проводится утром натощак.
- За сутки до исследования из рациона исключается жирная пища.
- Курение прекращают за 8 часов до анализа.
Забор крови производится путем венепункции. Материал отбирают в стерильную вакуумную пробирку с активатором свертывания для быстрого отделения сыворотки. Кровь доставляется в лабораторию в течение 2 часов. Микропробирки с сывороткой разрешается хранить в холодильнике при температуре 2-8 °С или в морозильной камере при -20 °С до 10 суток.
Для выявления бактерий применяется иммуноферментный анализ – ИФА. Это лабораторный метод предполагает исследование сыворотки крови. Путем химических реакций врачи определяют наличие в ней антител – специфических белков иммунологической природы, выделяющихся при воздействии на организм человека различных антигенов, не знакомых ему (чужеродных бактерий, вирусов, грибов, токсинов, аллергенов и т. д.). Helicobacter pylori является инфекционным возбудителем гастропатологии. При попадании в желудочно-кишечный тракт он активирует систему иммунитета и вызывает выработку антител – иммуноглобулинов (Ig). ИФА помогает диагностировать наличие или отсутствие данной инфекции.
Бывают ситуации, когда обнаруженные антитела в сыворотке крови является ложноположительным результатом. Это может быть связано с длительным циркулированием в плазме иммуноглобулинов после уничтожения бактерий вследствие эрадикационной терапии. Антитела присутствуют в крови в течение месяца после лечения, а у некоторых остаются пожизненно. В другом случае все наоборот. Инфицирование есть, а антитела в сыворотке крови не определяются (ложноотрицательный результат). Это может быть связано с ранним периодом после заражения. Антитела не успевают выработаться из-за слабого иммунного ответа. Чтобы избежать неточностей в результатах, необходимо дополнительно исследовать фракции иммуноглобулинов 3 видов: M, G, A.
Характеристики специфических белков крови:
Существует качественное и количественное определение антител к Helicobacter pylori. В первом случае диагностируют наличие специфических иммуноглобулинов, а во втором их концентрацию. При качественном анализе определяются суммарные антитела (IgM, IgG, IgA). При количественном исследовании используют нормы содержания специфических белков в крови.
У каждой лаборатории свои референсные значения, применяемые для определенного вида реактивов.
| Вид исследования | Норма | Патология |
| Качественный анализ на антитела к Helicobacter pylori | Отрицательный (отсутствие антител) | Положительный (наличие антител) |
| Количественный анализ на антитела к Helicobacter pylori: | Нормальные референсные значения | Превышение показателей |
| Отрицательный (значения IgM в пределах нормы) |
При нормальных показателях IgG и IgA инфицирования нет
Определяется сразу после заражения хеликобактериозом (выявляется в течение 3-4 недель от контакта с возбудителем)
IgG может быть ложноотрицательным в течение 3-4 недель после заражения (IgM положительный)
Инфицирование Helicobacter pylori
Может превышать норму в течение месяца после эрадикационной терапии
Может быть ложноотрицательным в ранний период после контакта с возбудителем (в течение 2-3 недель от момента заражения)
Чем выше концентрация IgA в сыворотке крови, тем активнее протекает воспалительный процесс
Возможны сомнительные результаты исследования. В таких случаях анализ на антитела к Helicobacter pylori повторяют через 2-3 недели.
- помогает выявить даже низкие концентрации возбудителя;
- безопасный метод, не сопровождается радиоактивной нагрузкой на пациента (при использовании тестовых растворов мочевины, меченой нерадиоактивными изотопами);
- оценивается процент бактерий на всей поверхности слизистой желудка;
- удобен для пациентов (неинвазивный метод);
- дыхательный уреазный тест с раствором карбамида разрешен беременным и младенцам;
- является точным диагностическим исследованием.
- Дыхательный уреазный тест проводится натощак. Перед исследованием с утра можно почистить зубы без применения ополаскивателей и освежителей для полости рта. Не рекомендуется использовать жевательные резинки.
- Накануне забора проб разрешен легкий ужин. С 22 часов вечера и до начала процедуры есть нельзя, питье отменяют за час до исследования.
- За 2-3 дня до аэротеста запрещен прием алкоголя (пары алкоголя искажают результаты проб). Также на этот период исключаются продукты, вызывающие метеоризм (капуста, бобовые, чеснок, яблоки, грибы, черный хлеб и другие).
- Курение прекращают за 8 часов до начала процедуры.
- За 2 недели до исследования отменяют препараты висмута (“Де-нол”, “Викалин”, “Викаир”), ингибиторы протонной помпы (“Омез”, “Нольпаза”, “Нексиум” и другие). Данные средства угнетают активность уреазы.
- За неделю до проведения теста прекращают прием нестероидных противовоспалительных и антибактериальных препаратов.
- За 2 дня до процедуры исключаются лекарственные средства из группы блокаторов Н2 – гистаминовых рецепторов (“Гистодил”, “Примамет”, “Ранитидин”, “Фамотидин” и другие).
- Разрешены препараты, снижающие избыточную продукцию соляной кислоты желудком (антациды – “Алмагель”, “Фосфалюгель”, “Маалокс”, “Гевискон” и т. д.).
Специфичность метода
Дыхательный уреазный тест на Helicobacter pylori связан с особенностями жизнедеятельности бактерии. Возбудитель в процессе своего существования выделяет защитный фермент – уреазу. Это биологически активное соединение помогает микроорганизму справляться с агрессивным воздействием соляной кислоты, выделяемой в составе желудочного сока. В процессе пищеварения уреаза расщепляет продукт метаболизма белков – мочевину. В результате образуется аммиак и углекислота. Эта химическая реакция стала основой для аэротеста. При дыхании пациента можно измерить концентрацию углекислого газа в выдыхаемом воздухе.
- Аэротест с применением тестового раствора или драже мочевины, меченой радиоактивным углеродом ( 14 С). Данный метод применяется редко из-за лучевой нагрузки на организм человека.
Пациент дышит через специальную трубку, находящуюся глубоко в ротовой полости. Дыхание должно быть ровным и спокойным. Трубка подсоединяется к специальному газовому спектрометру, замеряющему процент меченого углекислого газа в выдыхаемом воздухе. В начале процедуры берут 2 фоновые пробы аэротеста. Затем пациенту дают выпить тестовый раствор или проглотить специальное драже с мочевиной, меченой радиоактивным изотопом. Через каждые 15 минут (в течение часа) осуществляют забор дополнительных 4 проб выдыхаемого воздуха. Не допустимо попадание слюны в трубку, результат исследования может стать недостоверным. В этом случае пробу придется повторить через 40-60 минут после предыдущей. Чтобы избежать неприятной ситуации, трубку во время процедуры необходимо периодически вынимать, а слюну сглатывать.
- Дыхательный уреазный тест с применением стабильного раствора мочевины, меченой нерадиоактивным углеродом ( 13 С). Данный метод является “золотым стандартом” в диагностике хеликобактериоза (подробнее о методе см. здесь).
Во время исследования осуществляют забор 2 проб выдыхаемого воздуха. Процедура проводится на голодный желудок, в положении сидя. Пациент делает глубокий вдох и на несколько секунд задерживает дыхание. Затем выдыхает в герметичный одноразовый пакет, который сразу же плотно закрывают. Пациенту дают выпить тестовый раствор мочевины, меченой нерадиоактивным изотопом. Через полчаса осуществляют повторный забор выдыхаемого воздуха. С помощью масс-спектрометра измеряют концентрацию углекислоты в выдыхаемом воздухе. Полученные результаты сравнивают и делают выводы о наличии инфицирования.
- Аэротест с применением раствора мочевины (карбамида). Данная методика не является максимально точной. Рекомендуется для диагностики хеликобактериоза у беременных женщин и маленьких детей.
Методика схожа с предыдущим тестом. У пациента делают забор 2 проб выдыхаемого воздуха. Измеряют концентрацию углекислого газа до и после применения тестового раствора карбамида.
| Положительный (референсные значения превышают норму) | ||
| Отрицательный | ||
| Положительный | ||
| Отрицательный | ||
| Положительный | ||
| Вид исследования | Норма | Патология |
| Качественное определение уреазной активности Helicobacter pylori | Отрицательный аэротест |
Инфицирования нет или полное излечение после эрадикационной терапии
Инфицирование Helicobacter pylori
Хеликобактериоза нет
Во время проведения гастроскопии (ФГДС) врач-эндоскопист берет кусочек слизистой из любого отдела желудка. Биоптат помещают на реагентную тест-полоску, обработанную раствором мочевины. Под действием фермента уреазы, выделяемой бактериями Helicobacter pylori, происходит ощелачивание среды. Мочевина расщепляется. Вследствие этого индикаторная полоска меняет свою окраску – с желтой на малиновую. Тест считается положительным. От скорости изменения цвета реагента зависит выраженность воспалительного процесса и концентрация возбудителя в биоптате.
Оценка полученного результата:
- Helicobacter pylori (+) – слабое инфицирование (реагентная тест-полоска изменила свой цвет в течение суток).
- Helicobacter pylori (++) – умеренный инфекционный процесс (реагентная тест-полоска изменила свой цвет в течение 2-3 часов).
- Helicobacter pylori (+++) – тяжелое инфицирование (реагентная тест-полоска изменила свой цвет в течение одного часа).
- наиболее точный метод диагностики Helicobacter pylori (специфичность до 100%);
- исключает возможность ложноположительных результатов, подтверждает наличие инфекции.
- Процедура ФГДС предусматривает 3-х дневную диету с исключением продуктов, раздражающих пищеварительный тракт (нельзя жареные, копченые, соленые, жирные и острые блюда).
- Запрещаются газированные напитки, кофе, алкоголь.
- Диета бесшлаковая на основе легкоусвояемого меню (каши на воде, отварное мясо, йогурты, овощные салаты и т. д.). Последний прием пищи за 12 часов до проведения ФГДС.
- За 3 часа до начала исследования необходимо отказаться от сигарет.
- Нельзя принимать лекарства перед эндоскопической процедурой.
- Прием жидкости прекращают за 1-2 часа до начала исследования.
- Не разрешается перед процедурой чистить зубы, применять ополаскиватели или освежители для полости рта, а также жевательные резинки.
- Гастроскопия проводится на голодный желудок.
ФГДС сопровождается введением специального зонда в желудок. Процедура неприятна из-за диспепсических проявлений. Во время проглатывания зонда происходит раздражение рецепторов ротоглотки, и пациент испытывает чувство тошноты и рвотные позывы. Длительность процедуры обычно не превышает 10-15 минут. За это время специалист осматривает слизистую желудка и двенадцатиперстной кишки, выявляет очаги воспаления (эрозии, язвы, дефекты и т. д.) и проводит забор материала для последующего морфологического исследования.
Для бактериологического посева биоптата на питательную среду потребуется не менее 5 образцов тканей. Их помещают в стерильные пробирки с транспортным раствором. Затем доставляют в бактериологическую лабораторию. Helicobacter pylori выращивают на питательных средах в течение 3-6 дней, иногда дольше (до 12 суток).
Гистологическое исследование мазков-отпечатков, полученных из биоптатов слизистой желудка, является “золотым стандартом” среди инвазивных методов диагностики хеликобактериоза. Участки тканей при ФГДС берут с неповрежденного эпителия (исключают эрозивно-язвенные дефекты). Helicobacter pylori живет на здоровой слизистой желудка и двенадцатиперстной кишки. Затем полученные мазки-отпечатки окрашивают (по Романовскому-Гимзе, по Граму или другими красителями). Производят микроскопию. Бактерии обнаруживаются в желудочной слизи, располагаются свободно. Helicobacter pylori имеет характерные для него изогнутые формы: спиралевидную, в виде буквы “S” или распахнутых крыльев птицы.
| Положительный аэротест | ||
| Количественное определение уреазной активности Helicobacter pylori (по процентному содержанию изотопа в выдыхаемом воздухе) | Менее 1% | |
|
||
| Вид исследования | Норма | Патология |
| Бактериологический посев биоптата на Helicobacter pylori | Отрицательный |
(рост бактерий не обнаружен)
(на питательной среде выросли культуры Helicobacter pylori)
(бактерии в мазке отсутствуют)
- Слабая обсемененность Helicobacter pylori (+) – в поле зрения не более 20 бактерий
- Умеренная обсемененность Helicobacter pylori (++) – в поле зрения от 20 до 50 микроорганизмов
- Высокая обсемененность Helicobacter pylori (+++) – в поле зрения более 50 микробных тел
Резюме
Таким образом, существует 2 точных диагностических метода выявления хеликобактериоза. Они являются “золотым стандартом” в современной гастроэнтерологии. Первый метод – неинвазивный: дыхательный уреазный тест с раствором мочевины, меченой нерадиоактивным углеродом; второй – инвазивный: ФГДС с биопсией и последующим гистологическим изучением образцов тканей.
Для подтверждения инфицирования Helicobacter pylori требуется не менее 2 различных исследований. Диагноз ставят на основании клинической симптоматики и результатов, полученных в процессе лабораторных и эндоскопических мероприятий.
| Положительный | ||
| Гистологическое исследование биоптата на Helicobacter pylori (качественный анализ) | Отрицательный | |
| Положительный (обнаружена одна или большее количество бактерий при микроскопии) | ||
| Гистологическое исследование биоптата на Helicobacter pylori (количественный анализ) | Отрицательный (0 бактерий в мазке, инфицирования нет) | 3 степени распространения возбудителя (микроскопия на увеличении в 360 раз): |